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Introducción: La colagenasa-3 (MMP-13) es una metaloproteasa con potente actividad degradativa contra variados elementos de la matriz extracelular y de la membrana basal. Se ha descrito su expresión en carcinomas humanos de origen mamario, esofágico, gástrico, vejiga urinaria, condrosarcomas, cabeza y cuello y carcinomas escamosos de la piel. En los melanomas cutáneos malignos (MCM) también se ha descrito la expresión de MMP-13, mediante técnicas de hibridación “in situ” y análisis de Northen (Airola et al., Br J Cancer 1999; 80: 733-743).

Objetivo: Investigar la expresión de MMP-13 en una serie de MCM, su relación con las características de los pacientes y de sus tumores, y su posible significación pronóstica.

Pacientes y Métodos: La expresión de MMP-13 fue analizada mediante método inmunohistoquímico en los tumores de 55 pacientes tratados quirúrgicamente por MCM, que fueron sometidos a un periodo medio de seguimiento clínico de 41 meses.

Resultados: Un total de 24 MCM (43,6%) presentaron una tinción inmunohistoquímica positiva para la MMP-13. Esa tinción fue de localización intracitoplasmática en al menos el 20% de las células tumorales de los MCM positivos. El porcentaje de tumores positivos para la proteasa fue significativamente (p=0,02) superior en los pacientes de edad más elevada (>60 años) (60%) que en los pacientes con edades inferiores (30%). Asimismo, la expresión de MMP-13 estuvo positiva y significativamente (p=0,009) asociada con el número de mitosis por mm2 (0: 23.5%; 1-6: 44.8%; >7: 77.8%). Por otra parte, las pacientes con tumores MMP-13-positivos mostraron una menor probabilidad de supervivencia libre de enfermedad, si bien las diferencias no fueron estadísticamente significativas.

Conclusiones: este estudio preliminar muestra la expresión de la MMP-13 por un porcentaje significativo de MCM. Además, nuestros datos nos sugieren que la expresión de la proteasa puede estar asociada con un comportamiento biológico más agresivo en este tipo de tumores.

El melanoma maligno (MCM) es uno de los tumores mas frecuentes en personas jóvenes, y su incidencia se está incrementando mas rápidamente que la de cualquier otro tipo de cáncer (1). Así, se ha estimado que para finales de esta década, el riesgo de desarrollar MCM es de 1 por cada 17 americanos caucásicos (2-4). Este tipo de tumor maligno se caracteriza por una elevada capacidad de invasión y metástasis, pudiendo metastatizar a cualquier órgano, y sin que los mecanismos involucrados en dicho proceso estén del todo claros (5).
El papel de las metaloproteasas (MMPs) en la invasión y metástasis ha sido ampliamente estudiado en diferentes tipos de tumores. El principal interés de estas enzimas consiste en su papel potencial en la degradación de la membrana basal y matriz extracelular, facilitando así la invasión y metástasis. Las MMPs constituyen una familia de endopeptidasas dependientes de zinc, capaces de degradar componentes de la matriz extracelular (ECM), tales como colágeno, laminina, fibronectina y proteoglicanos, (6, 7). Hasta el presente, la familia de genes de MMPs contiene al menos 24 miembros que pueden ser divididos en subgrupos (colagenasas, gelatinasas, estromielisinas, MMPs de tipo membrana (MT-MMPs, y nuevas MMPs) de acuerdo a su estructura primaria y especificidad de sustrato (8, 9).
La colagenasa-3 (MMP-13) fue identificada por primera vez en cáncer de mama (10), es capaz de degradar los colágenos tipo I, II, III, IV, V, X, XIV, tenascina y fibronectina; (9, 11) Se ha reportado su expresión en diversos procesos, dentro de los que se incluyen: el desarrollo óseo fetal, remodelación ósea postnatal (12, 13), úlceras cutáneas crónicas, úlceras intestinales (14), periodontitis (15), osteoartritis (16) y artritis reumatoide (13, 17); así como también en algunos tumores tales como el cáncer de mama (10), cáncer de células escamosas de cabeza y cuello (18), cáncer de vulva (19), condrosarcoma (20, 21), carcinoma de células basales de la piel (22), carcinoma de vejiga urinaria (23), siendo su expresión en la mayoría de los casos asociada con peor pronóstico (24). Además, también ha sido descrita su expresión en melanomas (25).
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la expresión y posible significado clínico de la MMP-13 en una serie de MCM.

Pacientes y muestras tisulares
El material histológico, utilizado en este estudio fue obtenido de 55 pacientes (con edades entre 11 y 83 años) quienes fueron sometidas a cirugía de su MMC invasivo primario, y posteriormente a un periodo medio de seguimiento clínico de 41 meses.. Las características de las pacientes y sus tumores son mostradas en la Tabla_1. Los tumores fueron estadiados de acuerdo con los criterios del “American Joint Committee on Cancer” (AJCC) (26). Todas las muestras se fijaron en formol buferado neutro al 10% y fueron embebidas en parafina, siendo almacenadas a temperatura ambiente de 4 meses a 5 años, hasta que el estudio fue llevado a cabo.

Tinción inmunohistoquímica
Las tinciones inmunohistoquimicas se realizaron sobre cortes de tejidos de 5-mm, fijados en formol al 10% y embebidos en parafina, utilizando el Kit de detección EnVisionTM, peroxidasa/DAB, DAKO. El anticuerpo contra MMP-13 (diluido 1:200 en Antibody Diluent; Dako) se incubo a temperatura ambiente durante 30 min. Posteriormente, las preparaciones fueron incubadas con EnVision; Dako por 30 minutos a temperatura ambiente, y la reacción fue revelada con solución de diaminobenzidina concentrada (DAB) en buffer sustrato, que contiene peróxido de hidrógeno.

Análisis estadístico
La relación entre la tinción de MMP-13 y los factores clínico-patológicos fue evaluada mediante el test del Chi-cuadrado, con la corrección de Yates cando fue necesaria. Las curvas de supervivencia libre de enfermedad y de supervivencia global fueron calculadas por el método de Kaplan y Meier, y comparadas con el test log rank.

Un total de 24 MCM (43,6%) presentaron una tinción inmunohistoquímica para la MMP-13, la cual se localizó en la región intracitoplasmática de al menos el 20% de las células tumorales de los tumores positivos. En la Figura_1 se muestra un ejemplo de MCM positivo para la proteasa. En relación con las características de las pacientes y de sus tumores, el porcentaje de tumores positivos para MMP-13 fue significativamente superior (p=0,02) en los pacientes con edades superiores a los 60 años (60%) que en los pacientes con edades inferiores (30%). Asimismo, la expresión de MMP-13 estuvo positiva y significativamente (p=0,009) asociada con el número de mitosis por mm2 (0: 23,5%; 1-6: 44,8%; >7: 77,8%). No se observaron diferencias estadísticamente significativas para el resto de características evaluadas Tabla_1. Del mismo modo las pacientes con tumores MMP-13-positivos mostraron una menor probabilidad de supervivencia libre de enfermedad, aunque las diferencias no fueron estadísticamente significativas Figura_2.

Este estudio preliminar demuestra la expresión tumoral de la MMP-13 en un porcentaje significativo (43,6%) de MCM. Ello confirma la observación previa de que este tipo de tumores cutáneos pueden mostrar la capacidad de expresar la proteasa (25). Además, encontramos una relación significativamente positiva entre la expresión tumoral de MMP-13 y el número de mitosis, que es un factor asociado con la agresividad tumoral. Esta asociación sugiere un papel de la metaloproteasas en la progresión de los MCM. La MMP-13 podría facilitar la expansión de los melanomas a través de la degradación de la membrana basal y matriz extracelular. De acuerdo con esta hipótesis, nuestros resultados preliminares muestran una mayor tasa de recurrencias tumorales en los pacientes con MCM MMP-13-positivos, si bien esa asociación no resulta de momento significativa.
Así pues, nuestros resultados preliminares nos inducen a considerar que la expresión de MMP-13 podría tener un significado de pronóstico desfavorable en el MCM. Si bien serán necesarios futuros estudios para confirmar este punto, así como también para evaluar el posible interés de ésta y otras MMPs como posibles dianas terapéuticas mediante la utilización de inhibidores enzimáticos específicos

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