IV CONGRESO VIRTUAL HISPANO AMERICANO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA |
CONTENIDO |
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Abstract |
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Comentarios | |
Título | |
Resumen | |
Introducción | |
Material | |
Resultados | |
Discusión | |
Conclusiones | |
Referencias |
INTRODUCCIÓN | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Todos los anticuerpos que se utilizan en inmunohistoquímica tienen una serie de normas de uso marcadas por el fabricante, como son: la temperatura a la que deben ser almacenados ( 2-8º C ó –20º C), o la fecha límite de utilización. Por lo general, esta fecha suele tener un margen de utilización de varios meses después de su fabricación. Dichas normas han de cumplirse para el correcto
funcionamiento de los anticuerpos, lo que supone un mayor coste en caso
de que los viales hayan caducado sin haber sido agotados en su
totalidad. Por esa razón, en este trabajo se investiga si los
resultados finales de dicha técnica, se ven afectados por la
utilización de anticuerpos primarios caducados(1,2,3,4);
ya que en ocasiones los viales podrían llegar a su fecha de caducidad
sin haberse agotado.
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MATERIAL Y MÉTODOS | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Para la realización de este trabajo, desempeñado en el servicio de Anatomía Patológica de POVISA (Vigo), se utilizaron 11 anticuerpos primarios caducados: 5 de ellos eran anticuerpos conjugados con polímero y peroxidasa: CK-10, FVIII, LCA, PSA, CD-20, utilizando la técnica EPOSÒ (DAKO)(5) (Tabla 1).
Tabla 1: Técnica de Polímero conjugado con peroxidasa y anticuerpo(EPOS®).Los restantes eran monoclonales prediluídos(DAKO): bcl-2, colágeno IV, 34b E-12, CD-31, CD-68, utilizando la técnica de biotina-estreptavidina marcada (LSAB® DAKO) (5) (Tabla 2). Tabla 2: Técnica de Biotina-Estreptavidina marcada (LSAB®).Con dichos anticuerpos se realizó la técnica de Inmunohistoquímica a 228 casos comprendidos entre Febrero de 1999 y Agosto de 2000, correspondientes a secciones de piezas enviadas al laboratorio en formol tamponado al 10%, procesadas e incluidas en parafina (5-7), aplicando los métodos de inmunotinción señalados (Tablas 1 y 2). La recuperación antigénica se realizó con buffer citrato, pH 6.0,en olla a presión, durante 5 minutos. Una vez finalizada la técnica se valoraron los resultados de ésta al microscopio, sobre controles positivos, calificándolos como:
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RESULTADOS | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
La calidad de la inmunotinción fue excelente en todos los casos, no viéndose afectada por la caducidad de los anticuerpos primarios empleados (Tabla 3) .
Tabla 3: Características e inmunorreactividad de los anticuerpos primarios utilizados después de su fecha de caducidad.§ AC: AnticuerposREF.:Referencia CADUCID. MESES : Caducidad meses
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DISCUSIÓN | ||
A pesar de que la inmunotinción no se ve afectada por la utilización de dichos anticuerpos en nuestro caso, es recomendable que los sueros se consuman en su totalidad antes de su fecha de caducidad. Para evitar llegar a esta fecha sin que se hayan agotado los viales, se puede recurrir al método de "congelación" o al de mezcla de éstos anticuerpos concentrados con glicerol (4) . Dicha mezcla se hace en alícuotas, que se guardarán en un congelador a -20ºC, posteriormente se prepara la solución de trabajo en el mismo día de su utilización. No se recomienda realizar congelaciones y descongelaciones repetidas de una determinada alicuota. Ya que los resultados de la inmunohistoquímica
realizada, fueron satisfactorios (Tabla 3), creemos
que los fabricantes deberían revisar los períodos de utilización
recomendados, debido a que en algunos países, como Francia y Estados
Unidos, existen leyes que prohiben la utilización de anticuerpos
caducados.
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