IV CONGRESO VIRTUAL HISPANO AMERICANO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA IV-CVHAP

CONTENIDO

 

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APLICACIÓN DEL HORNO MICROONDAS EN LA REALIZACIÓN DE TÉCNICAS ESPECIALES.

C. Gómez de María, M. Reguera, M. Lago, E. Peláez, A. Fernández, F. Yebra, I. Antón, A. De la Fuente.

Servicio de Anatomía Patológica. Policlínico Vigo, S.A. Vigo Pontevedra, España. 

IV-CVHAP 2001 COMUNICACIÓN-E - 038

Fecha recepción: 14/02/2001
Fecha publicación: 20/05/2001
 Evaluación: Ver "Taller de Histología ..."

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RESUMEN
 
   INTRODUCCIÓN: Estudiamos la utilización del horno microondas (HM) para técnicas especiales, tratando de ver si permite reducir los tiempos sin perjuicio de la calidad. 

   MATERIAL Y MÉTODOS: Hemos realizado varias pruebas a diferentes técnicas escogidas aleatoriamente, comparando el método convencional con el HM. Las técnicas seleccionadas fueron las siguientes: Hierro, Giemsa, Orceína, Pas, Plata Metenamina, y Rojo Congo. Se utilizaron secciones histológicas de tejidos control con positividad para cada técnica, se cortaron a 4 micras, y fueron desparafinadas e hidratadas de forma convencional. 

   RESULTADOS Y DISCUSIÓN

   1. HIERRO

  • Método convencional: 30 min. en solución de ácido Clorhídrico-Ferrocianuro potásico a temperatura ambiente. 
  • Método HM: de 20 a 25 seg. a potencia máxima. Con 40 seg. hay desprendimiento del tejido, y con tiempos inferiores a 20 seg,. no se llega a la positividad de los depósitos de Fe. 

   2. GIEMSA

  • Método convencional: 30 min. en solución de Giemsa a temperatura ambiente. 
  • Método HM: 25 seg. a potencia máxima. Las pruebas efectuadas con menos de 20 seg. no mostraron en ningún caso una buena tinción. 

   3. ORCEÍNA

  • Método convencional: 45 min. en solución de Orceína 
  • Método HM: 10 seg. a potencia máxima. Con tiempos mayores la solución hierve por lo que el tejido se puede quemar o desprender. 

   4. PAS

  • Método tradicional: 2h 30min. en el reactivo de Schiff a 60º C. 
  • Método HM: 20 seg. a potencia máxima. De 40 a 25 seg. hay desprendimiento parcial del tejido. 

   5. PAME

  • Método tradicional: 1h 30 min. en solución de Plata Metenamina a 60º C. 
  • Método HM: 1min. 20seg. a potencia máxima. De 1min a 45 seg. disminuye considerablemente la calidad de la tinción. 

   6. ROJO CONGO

  • Método tradicional: 20min. en solución de Rojo Congo. 
  • Método HM: 2min. a potencia media. Con tiempos inferiores queda una tinción muy débil y a mayor potencia el tejido se quema o desprende.

Palabras clave: horno microondas | técnicas especiales | hierro | Giemsa | orceína | PAS | plata metenamina | rojo congo
   

IMÁGENES


Figura 1.-

Figura 1

Figura 2.-

Figura 2

Figura 3.-

Figura 3

Figura 4

Figura 4

Figura 5

Figura 5

Figura 5

Figura 6



   

INTRODUCCIÓN
   
   Una de las necesidades actuales que se presentan en un Servicio de Anatomía Patológica es la de obtener secciones para estudio histológico en tiempos breves.

   Nosotros hemos estudiado la utilización del horno microondas (HM) para técnicas histoquímicas especiales, tratando de ver si permite reducir los tiempos sin perjuicio de la calidad de la tinción.

   

MATERIAL Y MÉTODOS
 
   Hemos realizado varias pruebas a diferentes técnicas escogidas aleatoriamente, comparando el método convencional y con el HM (SANYO TYP. EM-740 (WH), 220-230V-50Hz, 1250W. Magnetron 2450 mHz de 700 Watios de potencia).

   Las técnicas seleccionadas fueron las siguientes: Hierro Perls (Fe), Giemsa, Orceína, Pas, Plata Metenamina (PAME), y Rojo Congo (RC).

   Se utilizaron secciones histológicas de tejidos control con positividad para cada técnica, se cortaron a 4 micras, y fueron desparafinadas e hidratadas de forma convencional.

   En el PAS, PAME, Y RC, hubo desprendimiento total o parcial del lo tejido por lo que se optó por la utilización de portas silanizados en estas tres técnicas.

   

RESULTADOS


   1. HIERRO PERLS 
  • Método convencional: 30 min en la solución de ácido Clorhídrico-Ferrocianuro potásico a temperatura ambiente.
  • Método HM: de 20 a 25 seg a potencia máxima.

Con 40 seg a potencia máxima hay desprendimiento del tejido, y con tiempos inferiores a 20 seg, no llega a la positividad de los depósitos de Fe.

   2. GIEMSA 

  • Método convencional: 30 min. en la solución de Giemsa a temperatura ambiente
  • Método HM: 25 seg a potencia máxima.
    Las pruebas efectuadas con menos de 20 seg no mostraron en ningún caso una buena tinción.

   3. ORCEÍNA 

  • Método convencional: 45 min en la solución de Orceína
  • Método HM: 10 seg a potencia máxima.
    Con más tiempo la solución hierve por lo que el tejido se puede quemar o desprender.

   4. PAS 

  • Método tradicional: 2h 30min en el reactivo de Schiff a 60ºC
  • Método HM: 20 seg a potencia máxima.
    De 40 a 25 seg hay desprendimiento parcial del tejido.

   5. PAME 

  • Método tradicional: 1h 30min en solución de Plata Metenamina a 60ºC
  • Método HM: 1min 20seg a potencia máxima
    De 1min. a 45 seg. disminuye considerablemente la calidad de la tinción.

   6. ROJO CONGO 

  • Método tradicional: 20min en solución de Rojo Congo.
  • Método HM: 2min a potencia media.
    Con tiempos inferiores queda una tinción muy débil y a mayor potencia el tejido se quema o desprende.

       

DISCUSIÓN
 
   El ahorro de tiempo es considerable en todas las técnicas ya que el tiempo de incubación en los reactivos utilizando en horno microondas varía de 10 segundos a potencia máxima a 2 minutos a potencia media, mientras que por el método convencional varía desde 30 minutos a 2 horas 30 minutos.

   En el Hierro Perls, PAS, y PAME, se mejora la calidad de la tinción con respecto a las técnicas convencionales.

   En el Rojo Congo, Orceína y Giemsa las deferencias observadas no fueron tan significativos como en las otras técnicas.

   Las técnicas se deben protocolizar en cada servicio de Anatomía Patológica ya que existe poca reproducibilidad entre los distintos hornos microondas.

   

 

NOTAS AL PIE DE PÁGINA
 
   Correspondencia: C. Gómez de María. Servicio de Anatomía Patológica. Policlínico Vigo, S.A. Vigo Pontevedra, España. mailto:netpat@arrakis.es 
   

REFERENCIAS
 
1. Métodos histotecnológicos. Prophet EB, Mills B, Arrington JB, Sobin LH. Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos (AFIP). 1995

2. Laboratorio de Anatomía Patológica. García del Moral R. Interamericana Mc Graw-Hill. 1993