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Ventajas de la tecnica de Luna para celulas cebadas en la demostracion histologica de las fibras elasticas.

Tecn Maritza Gonzalez Fernandez , Lic. Nelsa Gonzalez Torres , Tecn. Nancy Borrego del Toro y Dr. René Millares López

autores: Tecn Maritza Gonzalez Fernandez Lic Nelsa Gonzalez Torres Tecn Nancy Borrego del Toro

Cuba
 Resumen
Con la coloración convencional de hematoxilina y eosina las fibras elásticas no se identifican y hay que realizarle técnicas especiales .Una de las mas utilizadas generalmente en todos los Departamentos de Anatomía Patológica es la técnica de Verhoeff para la demostración de las mismas.
La técnica de Luna es una coloración utilizada para mastocitos pero en sus resultados también colorea las fibras elásticas y con el objetivo de presentar un estudio sobre la utilidad de ambas técnicas para la demostración de las fibras elasticas se presenta este trabajo.


 Introducción
En 1869 Nettleship describió una enfermedad con lesiones pigmentadas pruriginosas que denomino urticaria Pigmentosa o Mastocitosis. Posteriormente Hansen y Clausen demostraron con métodos bioquímicos que se asociaba a altos niveles de mucopolisacaridos ácidos en orina y de histamina en sangre confirmados por estudios histológicos.

En los Departamento de Anatomía Patológica generalmente se utiliza la técnica de Verhoeff para la demostración de fibras elásticas.

Con la coloración convencional de Hematoxilina y Eosina estas fibras no se identifican y se debe utilizar una técnica que las coloree para su mejor visualización.

La Técnica de Luna para Mastocitos es una técnica como su nombre lo indica para la coloración de mastocitos, pero también colorea las fibras elásticas.

 Material y Métodos
Se seleccionaron 10 bloques en los cuales teníamos conocimiento que existía la presencia de fibras elástica, entre los que se encontraba un Pseudoxantoma Elástico. Todos los especímenes de tejido estaban fijados con formol neutro y procesados para su deshidratación, desalcoholización e imbibición en parafina; todos fueron incluidos en parafina, cortadas en micrótomo vertical a tres micras, estirados los cortes en baño histológico a 37 grados y extendidos en láminas portaobjetos .A todos los cortes les fueron aplicadas ambas tecnicas de coloracion, o sea las Técnicas de Verhoeff y la Técnica de Luna para Mastocitos.

La Técnica de Verhoeff utiliza los siguientes colorantes: Hematoxilina, 1 gr; Alcohol absoluto, 25 cc; Lugol, 8 cc; Solución acuosa de cloruro férrico al
10 % ,8 cc. Y utilizamos como solución Diferenciadora Cloruro Férrico al 10%, 10 cc; Agua Destilada 40 cc. También utilizamos Hiposulfito de Sodio al 5% y se contrasta con Van Giesson.

La técnica de Luna para Células Cebadas (mastocitos) utiliza los siguientes colorantes: Fuschina Aldehídico 1gr; Etanol al 70 %, 200 ml; Acido Clorhídrico, 2 ml; Paraldehido fresco, 2ml. Además se prepara la solución de Hematoxilina de Weigert que contiene una solución A y B. La A se prepara con 1 gr,. de Hematoxilina y 100 ml de Alcohol al 95% y la B se prepara con 4 ml de Cloruro Férrico al 29 %, 95 ml de Agua Destilada y 1 ml de Acido Clorhídrico. También utilizamos la Solución Naranja de Metilo que se prepara con 0,25 gr. de Naranja de Metilo y 100 ml de Alcohol al 95 % .

Después de aplicada ambas técnicas se montan las láminas y se observan en microscopio óptico y se hace la valoración de ambas.







































 Resultados
Los resultados de la tecnica de Verhoeff son: Fibras Colágenas , rojas; Fibras Elásticas, Negras; el músculo se colorea de amarillo y núcleos negros.

Los resultados con la técnica de Luna las Fibras Elásticas se colorean de Púrpura, y los otros elementos de Azul.

Imagen de Ventajas de la tecnica de Luna para celulas cebadas en la demostracion  histologica de las fibras elasticas.Zoom
Coloracion de Verhoeff a menor aumento ( 10x ) donde se observan las fibras elasticas en el dermis de color negro.
Imagen de Ventajas de la tecnica de Luna para celulas cebadas en la demostracion  histologica de las fibras elasticas.Zoom
Coloracion de Luna para mastocitos a menor aumento ( 10x ) donde se aprecian las fibras elasticas de color purpura intenso
 Discusión
Una vez coloreada las láminas de las biopsias seleccionadas con ambas técnicas se hizo una valoración de las mismas mediante la observación con el microscopio óptico, por histotecnólogos y patólogos, para verificar la efectividad de las mismas .

Las fibras elásticas se observan con nitidez en las dos técnicas, las que resultan útiles para el diagnóstico de estas entidades que se caracterizan por la presencia de estas en afecciones como el Pseudoxantoma Elástico y la Elastosis Juvenil .

Notamos más rapidez a la hora de preparar las soluciones y en poner en práctica las coloraciones de las láminas con la técnica de Luna para mastocitos, que con la técnica de Verhoeff que es algo mas engorrosa.

La Técnica de Luna para Mastocitos es una técnica de fácil ejecución y para su preparación lleva menos reactivo y alcoholes lo que la hace más económica
 Bibliografia
1.- González Torres, Nelsa y col.. Pseudoxantoma elástico . Demostración en técnicas de Verhoeff y Luna para células cebadas. Trabajo presentado en el Forum de CT en el Hospital Pediátrico de Centro Habana .2002.

2.- Colectivos de autores de la Cátedra . Texto para la formación de técnicas de citohistopatología.Tomo II .1982.

 Comentarios

El 25/3/2004 17:41, Tec,Eduardo Boix dijo:

En la imagen presentada por ustedes no se demuestran los mastocitos o no se observan con claridad.Existen otras técnicas que los demuestran muy bien como es el Azul Acian, esta técnica es rápida y fácil de realizar.

El 29/3/2004 20:54, tecn Maritza Gonzalez dijo:

Eduardo lo que se esta demostrando en este trabajo no es el mastocito sino la fibras elasticas, con la tecnica para mastocitos.De todas formas muchas gracias por haber leido nuestro trabajo.
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