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Página Principal Comunicaciones	GASTRITIS POR HELICOBACTER HEILMANNII. DOS CASOS ESTUDIADOS CON MICROSCOPIA OPTICA DE ALTA RESOLUCION Dr. Hugo Góngora Jara* , Dr. Ernesto Hliba ** , Dr. Jorge Diconca *** , Bioq. Lida Bysaro **** , Histot Norma Berrotarán ***** y Alumno Benjamín Vera Barros****** *Médico Especialista en Anatomía Patológica. Clínica ERI y Cátedras de Patología e Histología del Instituto Universitario de Ciencias de la Salud Fundación H.A. Barceló. La Rioja. Argentina. **Especialista en Anatomía Patológica. Dr. en Medicina y Cirugía. Prof. Titular de la Cátedra de Patología. Facultad de Ciencias Químicas. Dpto. de Microscopía Electrónica. Universidad Nacional de Córdoba. ***Especialista en Cirugía General. Director Médico de la Clínica ERI. La Rioja. ****Bioquímica especialista en Gastroenterología. Laboratorio de Gastroenterología. Hospital Nacional de Clínicas. Universidad Nacional de Córdoba. *****Histotecnóloga. Dpto. de Microscopía Electrónica. Hospital Nacional de Clínicas. ******Ayudante alumno. Cátedra de Patología del Instituto Universitario de Ciencias de la Salud Fundación H.A. Barceló. La Rioja. Argentina
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Resumen INTRODUCCION: Esta bacteria, reportada por primera vez en 1987 por Dent y col. fue denominada inicialmente Gastrospirillum hominis. Han sido descriptos en asociación con gastritis, La mayoría de pacientes reportó contacto con perros, gatos o cerdos, considerándose una zoonosis. Estudios genómicos lo incluyen en la familia Helicobacter y se denominó Heilmannii en honor al patólogo alemán K Heilmann. La prevalencia es de 0.1%. Se ha descripto la asociación con linfoma MALT gástrico. Reportamos 2 casos de gastritis con estudios de alta resolución. MATERIAL Y METODOS: Mujer de 34 años y varón de 26 años, ambos con dispepsia y dolor abdominal recurrente, de 2 años y 9 meses respectivamente. Se realizaron endoscopías con tomas biopsias fijadas con formol y teñidas con Hematoxilina-Eosina, Giemsa y Warthin-Starry. Otras se fijaron con líquido de Karnovsky, incluídos en resinas epóxicas y secciones de 1 micra M.O.A.R. - H.R.L.M., teñidas con Fucsina-Toluidina. RESULTADOS: Macroscopía: Biopsias de 0,2 cm. c/u. Microscopía: Se los encontró en el mucus superficial o luz foveolar. La observación de la morfología y cantidad fue óptima con la coloración de Warthin-Starry. Las secciones para M.O.A.R. mostraron detalles como cambios degenerativos en células epiteliales con vacuolización y erosión, en íntima relación a gérmenes delgados y espiralados de 6 a 10 micras de longitud. El corion con moderado infiltrado linfoplasmocitario. y algunos neutrófilos. CONCLUSIONES: Presentamos 2 casos, de etiología infrecuente en gastritis, mostrando su morfología y daño epitelial sobre la mucosa gástrica, fácilmente evidenciables por M.O.A.R.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Introducción En 1987, Dent y col. Reportaron el hallazgo de una bacteria diferente al H pylori en la mucosa gástrica humana, y fue denominado Gastrospirillum hominis (1). Luego se han descripto casos similares, asociados a gastritis, confirmándose su distribución mundial. La mayoría de pacientes infectados han referido contacto con perros, gatos y aún cerdos, sugiriendo una zoonosis (2), (3), (4), (5). Andersen y cols. aislaron el germen en un medio artificial en 1999 (6). En 1993, por secuenciación del gen 16S rRNA bacteriano se demostró que el denominado Gastrospirillum hominis pertenecía al género Helicobacter(6), cambiando el nombre a Helicobacter heilmannii en honor al Patólogo alemán K Heilmann (7). Helicobacter heilmannii es una bacteria Gram-negativa espiralada, de longitud variable (6 a 10 micras d longitud), con 6 a 8 espirales regulares y flagelos polares en sus extremos(7). La prevalencia descripta en la literatura es de aproximadamente 0.1%. (4), (5) y (8). Ierardi y cols. encontraron 8 casos en una revisión de 7926 biopsias gástricas(8). Nosotros destacamos la presencia de 5 casos en una revisión de 215 biopsias gástricas, lo que equivale a una prevalencia del 2,3%. Se ha descripto la asociación con linfoma MALT gástrico (9). Reportamos dos de estos casos de gastritis por Helicobacter heilmannii con Microscopía Optica de Alta Resolución (M.O.A.R.) y tinción de Warthin-Starry, los cuales resultaron óptimos para la observación de detalles microscópicos.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Material y Métodos Mujer de 34 años y varón de 26 años, ambos con dispepsia y dolor abdominal recurrente, de 2 años y 9 meses respectivamente. Se realizaron endoscopías con tomas biopsias fijadas con formol y teñidas con Hematoxilina-Eosina, Giemsa. Una vez que se identificaron estos agentes, en la mujer de 36 años se tomaron nuevas biopsias para la fijación directa con Líquido de Karnovsky. En el varón de 26 años unas biopsias se fijaron en formol al 10% y otras directamente en líquido de Karnovsky. La muestras fijadas en líquido de Karnovsky, se incluyeron en resinas epóxicas, y se procesaron como “cortes gruesos para Microscopía Electrónica de Transmisión”. Estas secciones de aproximadamente 1 micra de espesor, obtenidas con cuchilla de cristal y Micrótomo Porter Blum; fueron montadas en un portaobjeto y coloreados con Fucsina-Toluidina. Posteriormente pueden ser observados en Microscopía de Luz y corresponden a la denominada Microscopía Optica de Alta Resolución (M.O.A.R.) o siglas en inglés: H.R.LM (High Resolution Light Microscopy).
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Resultados Macroscopía: Biopsias de 0,2 cm. c/u. Microscopía: La detección de Helicobacter heilmannii fue posible con tinción de Hematoxilina-Eosina y mejor evidenciada con Giemsa. Fácilmente identificable y distinguible con Hematoxilina-Eosina y aceite de inmersión a 1000 aumentos. Se los encontró en el mucus superficial o luz foveolar. La observación de la morfología y cantidad fue óptima con la coloración de Warthin-Starry en el paciente fig_1 y en la paciente fig_2. El corion en ambos exhibió moderado infiltrado linfoplasmocitario y algunos neutrófilos. A mayor aproximación se distingue la mayor longitud de estos elementosfig_3. El detalle comparativo con Helicobacter pylori a 1400 aumentos evidencia una diferencia notable fig_4. Las secciones para M.O.A.R. mostraron detalles como cambios degenerativos en células epiteliales con vacuolización y erosión fig_5 en íntima relación a gérmenes delgados y espiralados de 6 a 10 micras de longitud. Dichas secciones al ser tan finas, en general muestran a estos gérmenes en secciones transversales(imagen puntiforme) u oblicuas. La búsqueda cuidadosa en uno de los cortes de M.O.A.R., permitió ver en detalle uno de estos en sección longitudinal; y observado con aceite de inmersión se apreció su gran tamaño y aspecto espiralado fig_6. Zoom fig 1 Biopsia gástrica del paciente varón. Obsérvese los gérmenes en las luces glandulares. Inset: Se los observa con más detalle. Warthin-Starry. Zoom fig 2 Biopsia gástrica de la paciente. Abundantes gérmenes en epitelio de superficie y luces glandulares. Inset: Mayor detalle. Zoom fig 3 Nótese a mayor aumento la gran longitud y el aspecto espiralado. Warthin-Starry. Zoom fig 4 Izq: Helicobacter pylori.Der: H Heilmannii. Ambas imágenes a 1400 X. Warthin-Starry. Zoom fig 5 Microscopía Optica de Alta Resolución: Obsérvese la erosión y vacuolización de células epiteliales. Inset:Detalle de los cambios descriptos. Fucsina-Toluidina. Zoom fig 6. Microscopía Optica de Alta Resolución: Helicobacter Heilmannii. Obsérvese las células epiteliales con cambios degenerativos, secciones transversales de otros elementos y los detritus.1000x Fucsina-Toluidina.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Discusión La detección de Helicobacter heilmannii según nuestro análisis, puede ser dificultosa cuando solo se realiza con tinción de Hematoxilina-Eosina, en observadores sin experiencia previa. Es mejor evidenciada con Giemsa, la cual es realizada de rutina en nuestro Laboratorio. Pero luego de reconocer y mantener en mente su presencia, es fácilmente identificable y distinguible con Hematoxilina-Eosina, mejor aún con aceite de inmersión a 1000 aumentos. Las biopsias fijadas en Líquido de Karnovsky y procesadas como “cortes gruesos para Microscopía Electrónica de Transmisión” (M.O.A.R-H.R.LM) mostraron la morfología y daño epitelial sobre la mucosa gástrica, representadas por erosión y vacuolización de células epiteliales. Ierardi y cols. (8) describieron una característica histológica distintiva: Exudado de linfocitos en la luz de la foveola gástrica. Nosotros además identificamos aislados polimorfonucleares neutrófilos en apoptosis e histiocitos. La presencia de gastritis vinculada a esta infección, descripta en la literatura muestra una prevalencia de aproximadamente 0.1% (4), (5) y (8). Destacamos en este punto que en nuestra población estudiada tuvimos una prevalencia mayor (2,3%) sobre 215 casos, lo que será punto de partida de próximos análisis epidemiológicos. Es importante destacar que al considerarse una zoonosis (2), (3), (4), (5), el tratamiento del paciente, similar al del H. Pylori, el cual incluye amoxicilina, claritromicina, y un inhibidor de la bomba de protones, debería ser realizado también en los animales domésticos si los hubiere. El estudio de detección de Helicobacter heilmannii en pacientes con gastritis es posible con Hematoxilina-Eosina y es fácil una vez adquirido su conocimiento, se distingue mejor con Giemsa. La coloración de Warthin-Starry es óptima para el análisis de morfología y cantidad, pero solo los cortes con M.O.A.R. permitieron ver detalles como cambios degenerativos en células epiteliales, con erosión y vacuolización asociada a estos gérmenes.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Bibliografia 1. Dent JC, McNulty CAM, Uff JC, et al. Spiral organisms in the gastric antrum. Lancet 1987;2:96. 2. Stolte M, Wellens E, Bethke B, et al. Helicobacter heilmannii (formerly Gastrospirillum hominis) gastritis: an infection transmitted by animals? Scand J Gastroenterol 1994;29:1061–4. 3. Meining A, Roher GK, Stolte M. Animal reservoirs in the transmission of Helicobacter heilmannii. Results of a questionnaire based study. Scand J Gastroenterol 1998;33: 795–8. 4. Dieterich C, Wiesel P, Neiger R, et al. Presence of multiple “Helicobacter heilmannii” strains in an individual suffering from ulcers and in his two cats. J Clin Microbiol 1998;36:1366–70. 5. Norris CR, Marks SL, Eaton KA, et al. Healthy cats are commonly colonized with “Helicobacter heilmannii” that is associated with minimal gastritis. J Clin Microbiol 1999;37:189–94. 6. Solnick JV, O’Rourke J, Lee A, et al. An uncultured gastric spiral organism is a newly identified helicobacter in humans. J Infect Dis 1993;168:379–85. 7. Heilmann KL, Borchard F. Gastritis due to spiral shaped bacteria other than Helicobacter pylori: clinical, histological, and ultrastructural findings. Gut 1991;32:137–40. 8. Ierardi E, Monno RA, Gentile A, Francavilla R, Burattini O, Marangi S, Pollice L, Francavilla A. Helicobacter heilmannii gastritis: a histological and immunohistochemical trait. J Clin Pathol 2001;54:774–777. 9. Goteri G, Ranaldi R, Rezai B, et al. Synchronous mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma and adeno-carcinoma of the stomach. Am J Surg Pathol 1997;21:505–9.