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Página Principal Comunicaciones	EXPRESIÓN DE LA APOLIPOPROTEINA D EN EL MELANOMA CUTÁNEO MALIGNO: UN ESTUDIO INMUNOHISTOQUÍMICO MD Arancha Martin , Dr Francisco Vizoso Piñeiro , MD Isabel Quintela Baizán , Dr Antonio Martinez Merino , MD Eva Miranda y MD M Eugenia Seguí Servicio de Cirugia General, Medicina Familiar y Comunitaria y Anatomia Patologica del Hospital de Jove y de Cabueñes, Gijón. Asturias, España España
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Resumen INTRODUCCIÓN: La apoliproteína D es un componente del sistema de transporte lipídico humano en el plasma y una proteína regulada por andrógenos en líneas celulares del cáncer de mama y próstata. OBJETIVOS: Evaluar la expresión de apoliproteínaD en melanomas cutáneos malignos, así como evaluar su posible relación con los parámetros clínicos y patológicos. MATERIAL Y MÉTODOS: La expresión de apolipoprtoteína D fue analizada en 32 muestras embebidas en parafina, procedentes de pacientes con melanomas cutáneos malignos invasivos; 8 en muestras tomadas de melanomas “in situ” y en10 muestras de 10 lesiones benignas ( 4 nevus melanocíticos dérmicos, 4 nevus melanocíticos compuestos y 2 nevus melanocíticos displásicos) usando métodos inmunohistoquímicos. RESULTADOS: dentro de la estructura normal de la piel se detectó en las glándulas sudoríparas y en la vaina de los pelos. Las lesiones benignas fueron constantemente negativas para la apolipoproteína D, mientras que 3 de los 8 melanomas “in situ” (37,5%) y 12 de los melanomas invasivos (37,5%) mostraron inmunotinción positiva para la apolipoproteína D. El porcentaje de tumores apolipoproteína D-positivos fue significativamente mayor el melanomas de crecimiento nodular que en los de crecimiento superficial (p = 0,011) y en melanomas de crecimiento vertical que en los de fase de crecimiento radial (p = 0,02). Además el porcentaje de tumores apolipoproteína D-positivos fue positiva y significativamente correlacionada con el nivel de invasión de Clark (p = 0,046). CONCLUSIONES: La apolipoproteína D es expresada por un porcentaje significativo de melanomas cutáneos malignos donde parece estar relacionada con parámetros tumorales indicativos de una mayor agresividad. Así pues, la apolipoproteína D puede ser un factor pronóstico desfavorable en el melanoma cutáneo maligno, e indicativa de tumores que muestran una vía específica de respuesta hormonal.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Introducción La apolipoproteína D (apo D) es un componente del sistema de transporte lipídico humano en el plasma y una proteína regulada por andrógenos en líneas celulares del cáncer de mama y próstata, que fue descubierta por primera vez por Mc Conathy y Alaupovic(1). Esta glicoproteína posee una cadena polipeptídica de 30-kDa que muestra diferentes formas isoeléctricas y se asocia con lipoproteínas de alta densidad, cuya principal función es transportar pequeñas sustancias hidrofóbicas en el plasma2. También se ha sugerido que la apo D puede estar implicada en la esterificación del colesterol(2,3), así como en el transporte de una gran variedad de sustancias. Tras el hallazgo de altas concentraciones de la apo D el en fluido quístico de mujeres con enfermedad quística de la mama(4), así como en la secreciones mamarias obtenidas de mujeres no lactanates(5,6), se demostró también su presencia en un porcentaje significativo de carcinomas mamarios masculinos y femeninos(7,8,9), así como en otros tipos de tumores tales como el de próstata(10-12), ovario(13) o carcinoma de endometrio(14). Por otra parte altas concentraciones tumorales de la apo D se han correlacionado con un mejor pronóstico en la evolución del cáncer de mama(7,8), próstata(12) y carcinoma de ovario(13). A pesar de que la función específica que desempeñan en estos tejidos es todavía desconocida, diferentes estudios “in vitro” demostraron que la secreción de la apo D en cáncer de próstata o mama está regulada por andrógenos (andrógeno-dependiente) y se correlaciona inversamente con le grado de proliferación celular(15-17). Podríamos incluso decir que la expresión de la apo D estaría regulada por glucocorticoides(18), estrógenos(18,19), interleucina-1α(20) y ácido retinoico(21). Además también se ha propuesto a la apo D como un marcador bioquímico de acción hormonal en ambos tumores (mama y próstata) que podría asociarse a la inhibición del crecimiento tumoral y la regresión tumoral(10,21). El objetivo del presente trabajo fue investigar la expresión y la significación clínica de la apo D en una serie de melanomas cutáneos malignos (MCM).
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Material y Métodos Pacientes y muestras tisulares: El material histológico utilizado en este estudio fue obtenido de 32 pacientes con edades comprendidas entre los 11 y los 91 años diagnosticados de melanoma cutáneo maligno primario. Las características de los pacientes y de los tumores están reflejados en la tabla 1. También se analizaron 8 muestras correspondientes a melanomas cutáneos “in situ”, y 10 muestras de lesiones cutáneas benignas (4 nevus melanocíticos dérmicos; 4 nevus melanocíticos compuestos; y 2 casos de nevus melanocíticos displásicos). Purificación de la apolipoproteína D y producción de antisuero: Apo D fue purificada a partir del fluido quístico de mujeres con enfermedad quística de la mama según se describió previamente(4). La obtención de anticuerpos se realizó tal y como describimos previamente(7). Tinción inmunohistoquímica: La tinción inmunohistoquímica se realizó sobre cortes de 5μ de los bloques de parafina siguiendo el método biotina-streptavidina (Dako, Glostrup, Denmarck). Como control positivo se usaron células del epitelio quístico mamario con metaplasia apocrina. Las secciones fueron evaluadas por dos patólogos de forma independiente. Análisis estadísitico: La relación entre la Apo D y los factores clinicopatológicos fue examinada mediente el test del Chi-Cuadrado y la corrección de Yates cuando fue necesaria. La significación estadística fue definida como p<0,05.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Resultados Las lesiones benignas fueron constantemente negativas para la Apo D. Un total de 3 (37,5%) melanomas “in situ” y 12 (37,5%) melanomas invasivos mostraron una tinción positiva para la apo D, la cual se localizó en el citoplasma de al menos el 20% de las células cancerosas. La figura 1 muestra un caso representativo de tumor positivo. Además la positividad de la apo D se observó en los macrófagos adyacentes a las células malignas, así como en las células epiteliales de las glándulas sudoríparas y de la vaina de los pelos (Figura 2). La tabla 1 muestra la distribución de los valores de la Apo D en relación con las características tumorales y de los pacientes. Se encontraron diferencias significativas entre la expresión tumoral de la Apo D y la histología, nivel de invasión de Clark y fase de crecimiento tumoral. El porcentaje de tumores Apo D-positivos fue significativamente más alto en melanomas de crecimiento nodular que en los de crecimiento superficial ( p = 0,011). El porcentaje de tumores positivos para la proteína fue significativamente mayor en melanomas con un alto grado de invasión de Clark que aquellos con un bajo grado de invasión de Clark ( p = 0,046). Además, 12 (52,2%) de los 23 melanomas con fase de crecimiento radial fueron positivos para la apo D mientras que ninguno de los 9 tumores con fase de crecimiento radial mostraron inmunotinción positiva para la apo D ( p = 0,02). Zoom Figura 1: Tinción inmunohistoquímica positiva para el melanoma cutáneo maligno. La sección tisular fue teñida con antiapolipoproteína D (dilucción 1:500). Magnificación X200. Zoom Figura 2 Tinción inmunohistoquímica positiva de la Apo D en a, macrófagos; B, glándulas sudoríparas; c, vaina de los pelos. Las secciones tisulares fueron teñidas con antiapolipoproteína D (dilucción 1:500). Magnificación X200. Zoom Tabla 1. Apolipoproteína D en el melanoma cutáneo maligno de acuerdo a diferentes características.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Discusión La Apo D es una molécula con capacidad para transportar una gran variedad de sustancias hidrofóbicas tales como colesterol, progesterona, biliberdina, porfirinas y ácido araquidónico(22-26). Además, a diferencia de otras proteínas sintetizadas en el hígado, la Apo D puede ser sintetizada en otros órganos(2,27), lo que sugiere que la apo D puede desempeñar diferentes funciones en la fisiología celular dependiendo del tipo de tejidos y de las circunstancias. Nuestros resultados mostrando la expresión de la apo D por las glándulas sudoríparas, estarían de acuerdo a los primeros estudios que demostraron que esta proteína era sintetizada en las glándulas apocrinas donde participaba en el transporte de sustancias odoríferas usadas en fenómenos de comunicación en los mamíferos(28). El presente estudio también demuestra la presencia de este enzima en la vaina de los pelos, lo que podría estar en relación con un posible rol de la Apo D en el transporte de sustancias lipídicas implicadas en la lubrificación del pelo. No obstante la expresión de la Apo D por lo MCM parece ser consecuencia de una transformación maligna. Nuestros resultados demuestran que las células malignas de algunos melanomas “in situ” o de melanomas invasivos (37,5% de los casos de ambos tumores) podrían desarrollar la producción de algunas proteínas que como la apo D, se expresa también en condiciones normales por otros tipos de células cutáneas. Nuestros resultados muestran una asociación significativa entre la expresión de la apo D con diferentes parámetros indicativos de una mayor agresividad tumoral , tales como la histología nodular, el alto nivel de invasión de Clark o la fase de crecimiento vertical. El hallazgo de que la expresión de la apo D está aparentemente relacionada con lesiones que tienen un pronóstico desfavorable en el melanoma cutáneo, contrasta con estudios previos en los que se consideraba a la proteína como factor de buen pronóstico en el cáncer de mama(7,8), próstata(12) o carcinomas de ovario(13). Sin embargo, la expresión de la apo D parece tener una significación clínica diferente en los melanomas cutáneos humanos probablemente en relación con un mecanismo hormono-receptor. Esta hipótesis está basada en el hallazgo de que la apo D es una de las proteínas que es inducida por andrógenos en el cáncer de mama y próstata(16,18,29). A pesar de que el papel de los andrógenos en el melanoma cutáneo es desconocido, se demostró la presencia de receptores androgénicos en líneas celulares del melanoma(30). No obstante, tenemos que considerar que otros esteroides y otros factores como glucocorticoides, ácido retinoico o 1,25dihidrixivitamina D3, podrían inducir la expresión de la Apo D y por tanto estar implicados en la regulación de esta proteína en ciertos tumores humanos(18,31,21). Los resultados preliminares presentados en este trabajo nos llevan a considerar que la Apo D, un componente del transporte lipídico humano y una proteína inducible por andrógenos tanto en el cáncer de mama y próstata, puede ser un nuevo factor indicativo de evolución desfavorable en los melanomas.
Subir Resumen Introducción Material y Métodos Resultados Discusión Bibliografia	Bibliografia 1. McConathy WJ, Alaupovic P. Isolation and partial characterization of apolipoprotein D: a new protein moiety of the human plasma lipoprotein system. FEBS Lett 1973; 37: 178-182. 2. Drayna D, Fielding C, McClean J, et al. Cloning and expression of human apolipoprotein D cDNA. J Biol Chem 1986; 261: 16565-16569. 3. Francone OL, Gurakar A, Fielding C. Distribution and functions of lecitin: cholesterol acyltransferase and cholesterol ester transfer protein in plasma lipoproteins. J Biol Chem 1989; 264: 7066-7072. 4. Balbín M, Freije JMP, Fueyo A,et al. Apolipoprotein D is the major protein component in cyst fluid from women with human breast gross cystic disease. Biochem J 1990; 271: 803-807. 5. Sánchez LM, Vizoso F, Díez-Itza I, López-Otín C. Identification of the major protein components in breast secretions from women with benign and malignant breast diseases. Cancer Res 1992; 52: 95-100. 6. Vizoso F, Sánchez LM, Díez-Itza I, et al. Factors affecting protein composition of breast secretions from non lactating women. Breast Cancer Res Treat 1992; 23: 251-258. 7. Díez-Itza I, Vizoso F, Merino AM, et al. Expression and prognostic significance of aoplipoprotein D in Breast cancer. Am J Pathol 1994; 144: 310-320. 8. Serra C, Vizoso F, Lamelas ML, et al. Expression and clinical significance of apolipoprotein D in male breast cancer. Br J Surg 1999; 86: 1190-1197. 9. Serra C, Vizoso F, Lamelas ML, et al. Comparative study of two androgen-induced markers (apolipoprotein D and pepsinogen C in female and male breast carcinomas). Int J Surg Invest 2000; 2: 183-192. 10. Aspirall JO, Bentel JM, Horsfall DJ, et al. Differential expression of apolipoprotein D and prostate specific antigen in benign and malignant prostate tissues. J Urol 1995; 154: 622-628. 11. Zhang SXD, Bentel JM, Ricciardelli C, et al. Immunolocalization of apolipoprotein D, androgen receptor and prostate specific antigen in early stage prostate cancers. J Urol 1998; 159: 548-554. 12. Rodríguez JC, Díaz M, González LO, et al. Apolipoprotein D expresión in benign and malignant prostate tissues. Int J Surg Invest 2000; 4: 310-326. 13. Vázquez J, González LO, Merino AM, Vizoso F. Expresión of apolipoprotein D In ovarian carcinomas and correlation with clinicopathologic parameters. Ginecology Oncology 2000; 76: 340-347. 14. Vázquez J, González LO, Lamelas ML, et al. Apolipoprotein D in endometrial carcinomas. Acta Obstet Ginecol Scand 2001; 80: 148-152. 15. Simard J, Dauvois S, Haagensen DE, et al. Regulation of progesterone-binding breast cyst protein GCDFP-24 secretion by estrogens and androgens in human breast cancer cells: a new marker of steroid action in breast cancer. Endocrinology 1990; 126: 3223-3231. 16. Simard J, Veilleux R, de Launoit Y, et al. Stimulation of apolipoprotein D secretion by steroid coincides with inhibition of cell proliferation in human LNCaP prostate cancer cells. Cancer Res 1991; 51: 4336-4341. 17. Sugimoto K, Simard J, Haagensen DE, Labrie F. Inverse relationship between cell proliferation and basal or androgen-stimulated apolipoprotein D secretion in LNCaP human prostate cancer cells. J Steroid Biochem Molec Biol 1994; 51: 167-174. 18. Simard J, de Launoit Y, Haagensen DE, Labrie F. Additive stimulatory action of glicocorticoids and androgens on basal and estrogen-repressed apolipoprotein D messenger ribonucleic acid levels and secretion in human breast cancer cells. Endocrinology 1992; 130: 1115-1121. 19. Poulin R, Baker D, Labrie F. Androgens inhibit basal and estrogen-induced cell proliferation in the ZR-75-1 human breast cancer cell line. Breast Cancer Res Treat 1988; 12: 213. 20. Blais Y, Sugimoto K, Cariere M-C, et al. Potent stimulatory effect of interleukin-1alpha on lipoprotein D and gross cystic disease fluid protein-15 expression in buman breast-cancer cells. Int J Cancer 1994; 59: 400. 21. López-Boado YS, Díez-Itza I, Tolivia J, López-Otín C. Glucocorticoids and androgens up-regulate the Zn-alpha2-glycoprotein messenger RNA in human breast cancer cells. Breast Cancer Res Treat 1994b; 29: 247-258. 22. Lea JA. Binding properties of progesterone-binding cyst protein, PBCP. Steroids 1988; 52: 337-338. 23. Peitsch MC, Boguski MS. Is apolipoprotein D a mammalian bilin-binding protein? New Biol 1989; 2: 197-206. 24. Boyles JK, Notterpek LM, Anderson LJ. Accumulation of apolipoproteins in the regenerating and remyelinating mammalian peripheral nerve. J Biol Chem 1990; 265: 17805-17815. 25. Morais Cabral JH, Atkins GL, Sánchez LM et al. Arachidonic acid binds to apolipoprotein D: implications for the protein’s function. FEBS Letters 1996; 366:53-56. 26. Patel RC, Lange D, McConathy WJ, Patel YC. Probing the structure of the ligand binding cavity of lipocalins by fluorescence spectroscopy. Prot Eng 1997; 10: 621-625. 27. Milne RW, Rassart E, Marcel YL. Molecular biology of apolipoprotein D. Curr Opin Lipidol 1993; 4: 100-106. 28. Zeng C, Spielman AI, Voels BR, et al. A human axillary odorant is carrier by apolipoprotein D. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 6626-6630. 29. Haagensen DE, Stewart P, Dilley WG, Wells SA. Secretion of breast gross cystic disease fluid proteins by T47D breast cancer cells in culture-modulation by steroid hormones. Breast Cancer Res Treat 1992; 23: 77-86. 30. Morvillo V, Luthy IA, Capuro MI, et al. Atypical androgen receptor in the human melanoma cell line IIB-MEL-J. Pigment Cell Res 1995; 8: 135-141. 31. López-Boado YS, Tolivia J, López-Otín C. Apolipoprotein D gene induction by retinoic acid is concomitant with growth arrest and cell differentation in human breast cancer cells. J Biol Chem 1994a; 269: 26871-26878.